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V. Réalisation de l‘expérience

Mise à neuf de l‘échantillon

Peser 3 g de l‘échantillon, mélanger les dans l’Erlenmeyer avec 5 ml de dissolution d‘extraction puis, rédu-

ire en poudre fine à l‘aide d‘un mortier. Si vous n‘avez pas de mortier de taille suffisante, l‘échantillon peut

aussi être traité par petites quantités.

Ensuite, filtrer l‘extrait dans un filtre à plis et utiliser le filtrat pour effectuer la chromatographie à couche

mince. Si vous voulez effectuer la chromatographie à couche mince plus tard, le filtrat peut être conservé

au réfrigérateur à une température de –18°C pour quelques semaines.

Chromatographie à couche mince

Remarques: Toucher et transporter le papier à chromatographie uniquement à l’aide de la pincette positi-

onnée sur la marge du papier. Porter des gants d‘hygiène poule marquer pas par des empreintes digitales.

La réglette utilisée doit également être absolument propre.

Dans un premier temps, tirer à l‘aide d‘un crayon une fine ligne horizontale (cf. Application 1) à partir de la

marge inférieure de papier à chromatographie. Celle-ci représente la ligne de départ pour les échantillons

ou bien pour les standard d‘acides glutamiques. Au-dessous de cette ligne de départ, les sillons de cours

sont étiquetés avec 1,2,3, etc. de gauche à droite dans des espacements de 8mm. Une part du standard

d‘acide glutamique est diluée jusqu‘à 1:3 et 1:5 avec de H

O, pour qu‘on ait à disposition 3 standards de

concentrations 1mg/ml; 0,33 mg/ml et 0,2 mg/ml qui peuvent être appliqués également.

Le compartiment à chromatographie est rempli avec l‘éluant d‘une hauteur de 7 mm environ et bouché

avec le couvercle. Pour obtenir la saturation du compartiment, le laisser pour 15 min. minimum. Non seu-

lement des échantillons mais aussi des standards, sont appliqués 10µl sur la ligne de départ (au-dessus des

chiffres) à intervalles réguliers.

L‘application se fait à l‘aide des capillaires. Pour chaque échantillon et pour chaque standard, il faut

utiliser un nouveau capillaire. Pour effectuer l‘application, le papier à chromatographie se trouve horizon-

talement sur la table. Après l‘application, on ouvre le compartiment de chromatographie, on met alors le

papier à chromatographie, chargé des échantillons et des standards, dans le compartiment de manière que

la ligne de départ pointe vers le bas. On rebouche le compartiment de chromatographie. L‘éluant va alors

monter sur le papier à chromatographie. Au moment, où l‘éluant est monté environ 7 cm (mesuré à partir

de la ligne de départ), on prélève le papier du compartiment et le met sur la table pour le laisser sécher.

Il est possible d‘accélérer soigneusement ce processus de séchage à l‘aide d‘un sèche-cheveux (ou d‘une

étuve). Mais on peut également choisir le séchage lent à température ambiante.

Puis, la coloration peut être effectuée, sinon, le chromatogramme protégé de la lumière peut être conservé

dans le réfrigérateur. Le chromatogramme peut être entreposé pendant plusieurs journées avant de le

colorer.

Coloration des acides aminés

Remarques: Le bol doit être absolument propre, sans porter d’empreinte digitale ou d’autres choses sem-

blables, car chaque contamination de protéines sera colorée également.

Un peu de colorant dissolu est mis dans un bol de verre ou de matière plastique. Le papier à chromatogra-

phie est alors tiré brièvement (1 seconde) à travers du colorant, puis séché soit à l’air, soit dans l’étuve à

une température de 105° C. C’est alors qu‘on peut interpréter. Le chromatogramme coloré peut être entre-

posé à température ambiante dans l‘ombre. Le collage dans le cahier se fait au mieux avec des bandes

adhésives.

Sur la trace des exhausteurs de goût

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